有些微生物是有利於研究人員做研究的,所以需要將這些微生物菌種好好的保存起來。保存這些微生物一般是運用的冷凍技術,首先需要對盛放微生物菌種的儀器進行殺菌和消毒處理,避免這種微生物與其他微生物混合在一起,飯後將培養皿放於低溫狀態下保存。
取0.1~0.2ml菌體懸浮液,移植於適宜的瓊脂斜麵、平板培養基上,剩餘的菌液,注入適宜的液體培養基內,然後在建議的溫度下培養。若未能活化,或活化後有疑問時,請於收到菌種1個月內,通知保藏中心,經查證無誤後,即免費補寄。
注意事項:菌種活化前,請將安瓿管保存在6一10℃的環境下。厭氧菌的培養,如無特別說明,自開封至接種完成,均需以無氧氣體充填,以保持厭氧狀態。某些菌種經過冷凍幹燥保存後,延遲期較長,需連續兩次繼代培養才能正常生長,此時請將步驟二重複一次。
液氮超低溫保藏程序:容器的選擇:使用帶螺旋蓋的2ml塑料安培瓶。檢查安培瓶是否滲漏:用0.05%的亞甲基藍水溶液在4℃浸泡30-45分鍾,衝洗幹淨,棄去含有藍色染料的安培瓶,其餘的安培瓶備用。容器的滅菌:先用蒸餾水漂洗幹淨安培瓶,再用蒸餾水在滅菌鍋中121℃浸泡滅菌15分鍾,幹燥並將打印好的標簽放入安培瓶中,略擰緊螺旋蓋,再行121℃滅菌30分鍾。
保藏菌菌齡:處於生長量階段或對數生長期後期。保護劑:選用5-10%的甘油或二甲基亞碸作保護劑。甘油的準備:在121℃滅菌15分鍾,2-8℃貯存。甘油一般以兩倍所需濃度的水溶液保存,然後與同等量的細胞懸液混合。若不用細胞懸液,則以所需濃度的水溶液保存。
二甲基亞碸:用0.22um的聚四氟乙烯過濾膜過濾除菌。過濾膜預先用甲醇和二甲基亞碸漂洗。無菌的二甲基亞碸以10-15ml裝量2-8℃避光保存。分裝:在無菌條件下,將細胞懸液分裝於安培瓶中,並注入保護劑,擰緊螺旋蓋。