甲基化是目前的研究熱點,就我所做的一點工作並其中一點心得,與大家分享.希望能夠對大家有所幫助.一部分基因組DNA的提取.這一步沒有懸念,完全可以購買供細胞或組織使用的DNA提取試劑盒,如果實驗室條件成熟,自己配試劑提取完全可以.DNA比較穩定,隻要在操作中不要使用暴力,提出的基因組DNA應該是完整的.

    此步重點在於DNA的純度,即減少或避免RNA、蛋白的汙染很重要.因此在提取過程中需使用蛋白酶K及RNA酶以去除兩者.蛋白酶K可以使用滅菌雙蒸水配製成20mg/ml;RNA酶要配製成不含DNA酶的RNA酶,即在購買市售RNA酶後進行再處理,配製成10mg/ml.否則可能的後果是不僅沒有RNA,連DNA也被消化了.兩者均於-20度保存.

    紫外分光光度計計算OD比值;1%-1.5%的瓊脂糖凝膠電泳.我傾向於第2種方法,這種方法完全可以明確所提基因組DNA的純度,並根據Marker的上樣量估計其濃度,以用於下一步的修飾.

    第2部分亞硫酸氫鈉修飾基因組DNA如不特別指出,所用雙蒸水均經高壓蒸汽滅菌.將約2ugDNA於1.5mlEP管中使用DDW稀釋至50ul;加5.5ul新鮮配製的3MNaOH;42℃水浴30min;10mM對苯二酚氫醌,加30ul至上述水浴後混合液中;溶液變成淡黃色.

    3.6M亞硫酸氫鈉,配製方法:1.88g亞硫酸氫鈉使用DDW稀釋,並以3MNaOH滴定溶液至PH5.0,體積為5ml.這麽大濃度的亞硫酸氫鈉很難溶,但加入NaOH後會慢慢溶解,需要有耐心.PH一定要準確為5.0.加520ul至上述水浴後溶液中.